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用恒温培养箱进行生鲜牛乳中体细胞的测定

日期:2019-04-17 / 人气:

恒温培养箱进行生鲜牛乳中体细胞的测定
1.原理
    将测试的生鲜牛乳涂抹在载玻片上成样膜,干燥、染色,显微镜下对细胞核可被亚甲基蓝清晰染色的细胞计数。
2.试剂
    除非另有说明,在分析中仅使用化学纯和蒸馏水。
2.1乙醇,95%。
2.2四氯乙烷(Cz Hz Cl 4) 或三氯乙烷(C zHy Cl 3) 。
2.3亚甲基蓝(Ci6HisCIN3S·3H2O) 。
2.4冰醋酸(CH3COOH) 。
2.5硼酸(H3BO3)。
3.仪器
3.1显微镜:放大倍数x500或×1000,带刻度目镜、测微尺和机械台。
3.2微量注射器:容量0.01mLc
3.3载玻片:具有外槽圈定的范围,可采用血球计数板。
3.4水浴锅:恒温65℃±5℃。
3.5水浴锅:恒温35℃±5℃。
3.6电炉:加热温度40℃±10℃。
3.7砂芯漏斗:孔径≤10pm。
3.8干发型吹风机。
3.9恒温培养箱:恒温40℃~45℃。
4.染色溶液制备
    在250mL三角瓶中加人54.0mL乙醇和40.0mL四氯乙烷,摇匀;在65℃水浴锅中加热3min, 取出后加入0.6g亚甲基蓝, 仔细混匀; 降温后, 置人冰箱中冷却至4℃;取出后,加入6.0mL冰醋酸,混匀后用砂芯漏斗过滤;装人试剂瓶,常温贮存。
4.1采集的生鲜牛乳应保存在2℃~6℃条件下。若6h内未测定,应加硼酸防腐。硼酸在样品中的浓度不大于0.6g/100mL,贮存温度2℃~6℃,贮存时间不超过24h。
4.2将生鲜牛乳样在35℃水浴锅 中加热5min, 摇匀后冷却至室温。
4.3用乙醇将载玻片清洗后,用无尘镜头纸擦干,火焰烤干,冷却。
4.4用无尘镜头纸擦净微量注射器针头后抽取0.01mL试样,用无尘镜头纸擦干微量注射器针头外残样。将试样平整地注射在有外围的载玻片上,立刻置于恒温培养箱中,水平放置5mmin, 形成均匀厚度样膜。在电炉 上烤干, 将载玻片上干燥样膜浸入染色溶液 中,计时10min, 取出后凉干。若室内湿度大, 则可用干发型吹风机吹干; 然后, 将染色的样膜浸入水中洗去剩余的染色溶液,干燥后防尘保存。
5.测定
5.1将载玻片固定在显微镜的载物台上,用自然光或为增大透射光强度用电光源、聚光镜头、油浸高倍镜。
5.2单向移动机械台对逐个视野中载玻片上染色体细胞计数,明显落在视野内或在视野内显示一半以上形体的体细胞被用于计数,计数的体细胞不得少于400个。

作者:admin


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