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用二氧化碳培养箱做细胞培养及冻存
发布时间:2020-05-25 09:44浏览次数:

  首先做实验所需仪器耗材如下:
     二氧化碳培养箱、液氮罐、超低温低温冰箱、电热恒温水浴锅、离心机等。

   培养皿、滴瓶、吸管、离心管、烧杯、量筒、三角瓶、培养瓶等

下面小编给大家说下简易的实验步骤

    将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃电热恒温水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM完全培养基,轻轻吹匀,离心2min,弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的二氧化碳培养箱中培养。

     细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放入二氧化碳培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管离心2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经灭菌,保存于40℃)吸取10微升进行计数,按照1×105/盘接种,在含5%CO2的二氧化碳培养箱继续培养。

       加入1ml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内,立即放入一80℃超低温冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放入可以保存90天。