用恒温培养箱培养大鼠海马神经元原代细胞

日期:2018-12-17 / 人气:

     神经元培养的portocol,是较难培养的一种细胞。关键就是大鼠年龄的选择,是胎鼠,新生鼠还是成年大鼠,最理想的是胎鼠。今天喆图小编就从这个说起,用恒温培养箱培养大鼠海马神经元原代细胞的几种培养的方法。
 
1.海马分离:剖宫产取出胚胎,放在保存液中移至显微镜下操作取出胎脑,去掉小脑,从中线切开左右大脑半球。剥去软脑膜以及脉络丛血管。然后钝性分离海马,显微镜下用剪刀剪下海马即可
 
2. 组织消化和计数:每个取出的海马组织都放置在含有4℃培养液的试管中。快速分离数个胎鼠海马后就可以做消化和细胞计数了。消化液用经典的胰蛋白酶于恒温培养箱中 37℃恒温 30分钟即可。然后吹打(1000ul tip 10-20次,2ml 灼烧拉伸的玻璃管,口径与200ul tip相当,吹打10-20次)到看不到组织为止。很多protocol建议此刻离心。消化后去上清,留1-2ml直接吹打,然后就可以直接细胞计数。
 
3. 分盘培养:神经元会长的很大,所以密度要低,50000/ml就可以了,100mm的plate, 5-7ml。培养液用无血清无抗生素加B27和N2的DMEM效果就很好。培养皿要用PDL和含血清以及抗生素的培养液预处理72小时。这样可以避免感染也让神经元容易附着和分化。每一周加1-2ml的新鲜培养液,于恒温培养箱中37℃恒温,2-3周即可成熟。
 
4.染色检测:最后就是标记蛋白检测,一般可用MAP2标记神经纤维,一些神经递质受体标记突触,NeuN标记神经元细胞核。

作者:admin


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