神经元培养的portocol，是较难培养的一种细胞。关键就是大鼠年龄的选择，是胎鼠，新生鼠还是成年大鼠，最理想的是胎鼠。今天喆图小编就从这个说起，用恒温培养箱培养大鼠海马神经元原代细胞的几种培养的方法。

 

1.海马分离：剖宫产取出胚胎，放在保存液中移至显微镜下操作取出胎脑，去掉小脑，从中线切开左右大脑半球。剥去软脑膜以及脉络丛血管。然后钝性分离海马，显微镜下用剪刀剪下海马即可

 

2. 组织消化和计数：每个取出的海马组织都放置在含有4℃培养液的试管中。快速分离数个胎鼠海马后就可以做消化和细胞计数了。消化液用经典的胰蛋白酶于恒温培养箱中 37℃恒温 30分钟即可。然后吹打(1000ul tip 10-20次，2ml 灼烧拉伸的玻璃管，口径与200ul tip相当，吹打10-20次)到看不到组织为止。很多protocol建议此刻离心。消化后去上清，留1-2ml直接吹打，然后就可以直接细胞计数。

 

3. 分盘培养：神经元会长的很大，所以密度要低，50000/ml就可以了，100mm的plate, 5-7ml。培养液用无血清无抗生素加B27和N2的DMEM效果就很好。培养皿要用PDL和含血清以及抗生素的培养液预处理72小时。这样可以避免感染也让神经元容易附着和分化。每一周加1-2ml的新鲜培养液，于恒温培养箱中37℃恒温，2-3周即可成熟。

 

4.染色检测：最后就是标记蛋白检测，一般可用MAP2标记神经纤维，一些神经递质受体标记突触，NeuN标记神经元细胞核。